ערכת צביעת פלואורסצנטי ירוקה לממברנה DiO Cell

 

שם המוצר	חָתוּל. לֹא	מפרט
ערכת צביעת פלואורסצנטי ירוקה לממברנה DiO Cell	G1704	100-1000 T

 

 

DiO, הידוע גם בשם DiOC18(3), 3-octadecyl-2-[3-(3-octadecyl-2(3H)-benzoxazol-2-yliden )-1-פרופן-1-יל]בנזוקסאזול פרכלוראט, עם משקל מולקולרי של 881.72, היא מחלקה של ליפופיליות ארוכות שרשרת צבעי dialkyldicarbocyanine, צבעים פלואורסצנטיים, בשימוש נפוץ בתיוג של ממברנות תאים ומבנים ביולוגיים מסיסים בשומן אחרים. לאחר הכניסה לממברנת התא, DiO יכול להתפזר לרוחב ובהדרגה לצבוע את כל קרום התא. הקרינה של DiO חלשה מאוד לפני הכניסה לממברנת התא, ועוצמת הקרינה תוגבר מאוד כאשר היא נקשרת לתא, והיא יכולה לפלוט פלואורסצנטי ירוק. לאחר עירור וניתן לזהות על ידי מסנני FITC סטנדרטיים. אורך גל העירור המרבי של DiO הוא 484 ננומטר, ואורך הגל המרבי של הפליטה הוא 501 ננומטר. על פי המאפיינים של DiO, הוא יכול לצבוע תאים חיים כמו גם תאים קבועים. בנוסף. בדיקות DiO בדרך כלל אינן משפיעות על הכדאיות של תאים, כך שתאים מסומנים קדימה או הפוך או חומרים מסוימים (אקסוזומים) יכולים לשמש כזיהוי נותבים.

ערכת צביעת הקרינה הירוקה של תא DiO מכילה בדיקת קרינה DiO ומאגר צביעה אופטימלי, שיכול להפוך את הצביעת קרום התא למהירה יותר, הקרינה לבהירה ויציבה יותר.

 

 

ספינה עם קרח יבש; לאחסן ב--20 מעלות בחושך, תקף ל-6 חודשים.

 

 

מספר רכיב	רְכִיב	G1704
G1704-1	בדיקה פלואורסצנטי ירוקה של קרום תא DiO	400 μL
G1704-2	חיץ מכתים	100 מ"ל
יָדָנִי		עותק אחד

 

 

1. הכנת תמיסת עבודה לצביעה DiO:

ערבבו ודלל פרוב פלואורסצנטי ירוק ממברנת תא DiO עם מאגר מכתים ביחס של 1:250 להכנת תמיסת עבודה מכתים DiO (מוכן לשימוש); שים לב שניתן להתאים את יחס דילול ה-DiO probe ל-1:250-1:500 בהתאם למצב הספציפי על מנת להשיג את אפקט הצביעה הטוב ביותר.

2. צביעה של תאי השעיה חיים

2.1. צנטריפו את התאים התלויים ב-500-1,000×g בטמפרטורת החדר למשך 3-5 דקות, הסר את הסופרנטנט של התא;

2.2. הוסף כמות מתאימה של תמיסת עבודה מצביעת Dio כדי להשהות מחדש תאים לצפיפות תאים סופית של 1-2×106 תאים/מ"ל.

2.3. דגירה ב-37 מעלות בחושך למשך 5-20 דקות. זמן הדגירה האופטימלי משתנה עבור תאים שונים. התחל עם 5 דקות וייעל את זמן הדגירה על סמך תוצאת הצביעה הסופית.

2.4. בסיום הדגירה, צנטריפוגה ב-500-1000 g למשך 3-5 דקות בטמפרטורת החדר ושאוב את תמיסת העבודה לצביעה של DiO;

2.5. תאים הושעו מחדש עם PBS שחומם מראש או מדיום תרבית תאים ב-37 מעלות ועברו צנטריפוגה ב-500-1000 גרם למשך 3-5 דקות כדי להסיר את הסופרנטנט;

2.6. חזור על שלב 2.5.

2.7. זוהה על ידי ציטומטריית זרימה ישירות או על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי לאחר העברת תאים לצלחת מרובת בארות, צלחת תרבית תאים או שקף טיפוס תאים. ל-Dio יש מקסימום עירור ב-484 ננומטר ומקסימום פליטה ב-501 ננומטר.

3. צביעה של תאים חיים צמודים (6-צלחת באר כדוגמה):

3.1. זרעים תאים נצמדים בצלחת 6-בבאר בצפיפות מסוימת.

3.2. הסר את מדיום התרבות ושטוף את התאים פעמיים עם PBS (ממליץ על G4202). הוסף 1 מ"ל של תמיסת עבודה מכתים Dio (צלחות באר בגודל אחר, מותאמות בהתאם כדי להבטיח שהצבע מכסה את התאים);

3.3. דגירה ב-37 מעלות בחושך למשך 5-20דקות. זמן הדגירה האופטימלי משתנה עבור תאים שונים. התחל עם 5 דקות וייעל את זמן הדגירה על סמך תוצאת הצביעה הסופית.

3.4. שאפו את תמיסת העבודה לצביעה של קרום התא ושטפו את התאים 1-2 פעמים עם PBS או מדיום תא מחומם מראש.

3.5. הוסף מדיום תרבית תאים שחומם מראש או מדיום תא ב-37 מעלות וזיהוי תאים במיקרוסקופ פלואורסצנטי. ל-Dio יש מקסימום עירור ב-484 ננומטר ומקסימום פליטה ב-501 ננומטר.

4. צביעה של תאים דביקים קבועים:

4.1. עיבוד מקדים לדוגמה:

לתאים: הסר את המדיום של התא ושטוף 1-2 פעמים עם PBS. הוסף 4% תמיסת פרפורמלדהיד לתקן (המליץ ​​על G1101) למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. הסר תמיסת תיקון ושטוף 2-3 פעמים עם PBS;

4.2. חלחול: הוסף 0.1-0.5% טריטון-100 (הוכן עם PBS) וחדור ל-10 דקות בטמפרטורת החדר. הסר תמיסת חלחול ושטוף 2-3 פעמים עם PBS.

4.3. (אופציונלי, תיוג אימונופלורסצנטי) דגירה עם נוגדנים לפי פרוטוקול צביעת חיסונים או דגירה עם צבעים אחרים.

הערה: תמיסה חוסמת, מדלל נוגדנים ותמיסת כביסה לצביעה חיסונית לא אמורות להכיל חומרי ניקוי.

4.4. הוסף כמות מתאימה של תמיסת עבודה מצביעת DiO כדי לכסות את התאים, דגירה ב-37 מעלות הרחק מאור למשך 5-20 דקות, ושאוב את תמיסת העבודה מצביעת DiO. מומלץ להתאים את זמן הצביעה לדגימת התא הספציפית כדי לקבל תוצאות צביעה אופטימליות;

4.5. תאים נשטפו 2-3 פעמים עם PBS ולאחר מכן הוכנסו תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי לתצפית (צריך לכסות את התאים בכמות מתאימה של PBS). ל-DiO יש אורך גל עירור מרבי של 484 ננומטר ואורך גל פליטה מרבי של 501 ננומטר.

5. תיוג פלורסנטי של אקסוזומים:

5.1. משקעים אקסוזומים מושחים מחדש עם כמות מתאימה של תמיסת עבודה מכתים DiO.

5.2. דגירה ב-37 מעלות למשך 30 דקות בחושך.

5.3. (אופציונלי) דלל את הדגימה עם 10-פיפול נפח PBS.

5.4. חילצו שוב אקסוזומים לפי פרוטוקול המיצוי הקודם כדי להסיר עודפי צבעים.

5.5. אספו משקעים של אקסוזומים והושפו מחדש ב-PBS כדי להשיג אקסוזומים שכותרתם DIO. זה יכול לשמש עבור ניסויים הבאים, כגון קליטה סלולרית.

 

 

1. לכל צבעי הפלורסנט יש בעיות מרווה, נא להגן מפני אור במהלך הפעולה כדי להאט את כיבוי הקרינה.

2. בגלל שהבדיקה היא ליפופילית, נא להימנע משימוש בריאגנטים המכילים גליצרין או חומר אורגני אחר.

3. אם נדרש קיבוע, אנו ממליצים לתקן ב-4% פרפורמלדהיד. פתרונות תיקון לא הולמים אחרים יובילו לרקע פלואורסצנטי גבוה.

4. יש להתאים את יחס הדילול האופטימלי וזמן הדגירה של הבדיקה בהתאם למצב בפועל בשל הרגישות השונה בין התאים ודרישת הניסוי.

5. למען בטיחותך ובריאותך, נא ללבוש משקפי בטיחות, כפפות או ביגוד מגן.

 

לשימוש מחקר בלבד!

 

 

תגיות פופולריות: ערכת צביעת קרום קרינה ירוקה של dio cell, יצרנים, ספקים, מפעלים, ערכת צביעת פלואורסצנטי ירוקה של קרום dio cell