ערכת DNA גנומי צמחית עבור פוליסכרידים ופוליפנולים

 

שם המוצר	חתול מס.	מפרט
ערכת DNA גנומי צמחית עבור פוליסכרידים ופוליפנולים	G3643-50T	50 T

 

 

הערכה תוכננה במיוחד למיצוי בטוח, מהיר ויעילה של DNA גנומי בטוהר גבוה מדגימות פטריות ומרקמות צמחים מורכבות שונות העשירות בפוליסכרידים, פוליפנולים. מערכת חיץ התמוגה עברה אופטימיזציה קפדנית כדי לא רק לטחון ולזהות דגימות רקמות צמחיות ישירות, אלא גם להסיר ביעילות זיהומים כגון פוליסכרידים, פוליפנולים וחלבונים. ניתן להשלים את התהליך כולו תוך שעה אחת, וניתן להשתמש ב-DNA הגנומי הטוהר הגבוה המופק לניסויים שונים בביולוגיה מולקולרית, כולל PCR, תגובת עיכול אנזים, הכלאה דרום, RAPD, AFLP, RFLP ואחרים.

 

 

RNase A נשלח עם קרח רטוב ומאוחסן ב--20 מעלות; ריאגנטים אחרים נשלחים ומאוחסנים בטמפרטורת החדר; תקף ל-12 חודשים.

 

 

מספר רכיב	רְכִיב	G3643-50T
G3643-1	חוצץ PGLA	40 מ"ל
G3643-2	חוצץ PGLB	8 מ"ל
G3643-3	Buffer GB	12 מ"ל
G3643-4	Buffer GD	12 מ"ל
G3643-5	Buffer PW	24 מ"ל
G3643-6	RNase A	500 μL
G3643-7	עמודות ספין של DNA	50
G3643-8	צינורות איסוף	50
G3643-9	Buffer TE	10 מ"ל
יָדָנִי		עותק אחד

 

 

1. דגימות הצמח שנשמרו בהקפאה צריכות להימנע מהקפאה והפשרה חוזרת, אחרת האיכות והתפוקה של ה-DNA המופק יפחתו.

2. אם Buffer PGLA משקע, נא לחמם אותו ל-65 מעלות ולהשתמש בו כאשר הוא משוחזר לטמפרטורת החדר.

3. לפני השימוש, נא להוסיף 28 מ"ל איזופרופנול למאגר GB ולערבב היטב.

4. לפני השימוש, נא להוסיף 18 מ"ל אתנול מוחלט למאגר GD ו-56 מ"ל אתנול נטול מים למאגר PW.

5. לכמות הראשונית של דגימות רקמות צמחיות יש השפעה רבה על השפעת המיצוי של gDNA. אם הכמות ההתחלתית גדולה מדי, איכות המיצוי והתפוקה היחסית של gDNA תפחת. לפני תחילת הניסוי, אנא עיין בטבלה הבאה עבור שימוש ב-Buffer PGLA וב-Buffer PGLB התואמים לכמות התחלתית שונה של דגימות רקמות צמחיות.

 

טבלה 1 שימוש ב-Buffer PGLA וב-Buffer PGLB התואם לכמות התחלתית שונה של דגימות רקמות צמחיות

שימוש בדגימות רקמות צמחיות	שימוש במאגר PGLA	שימוש במאגר PGLB
פחות או שווה ל-50 מ"ג	500 μL	100 μL
50~200 מ"ג	750 μL	150 μL

 

 

1. ליזה של רקמות צמחיות:

א. (מומלץ) הוסף מראש כמות מתאימה של Buffer PGLA (שימוש מומלץ בטבלה 1) לצינור טחינה 2.0 מ"ל ללא Nuclease (מומלץ HT-200-M), ולאחר מכן הוסף 3~{ {6}} מ"מ חרוזי נירוסטה (מומלץ G0104-200G). לאחר מכן, העבר במהירות 50 ~ 100 מ"ג רקמת צמחים טריים או משומרים לצינור הטחינה. הנח את צינור הטחינה על המטחנה (מומלץ KZ-5F-3D) ופעל לפי הליך הטחינה המומלץ: הגדר את התדר ל-70 HZ, טחינה במשך 30 שניות בכל פעם, חזור על התהליך 15~20 פעמים עם מרווח של 5 שניות בין כל טחינה. אם הדגימה קשה לטחינה, כגון זרעים, ניתן להגדיל את זמני הטחינה ל-30 או יותר. אם הרקמה אינה הומוגנית ביסודיות, זה ישפיע על התפוקה ואיכות ה-DNA. לאחר השלמת הטחינה, הוסף 10 μL RNase A לצינור הטחינה, ערבב את התוכן הפוך ודגירה ב-65 מעלות למשך 15 דקות, תוך ערבוב הפוך כל 5 דקות.

ב. העבר במהירות רקמות צמחיות טריות או שמורות להקפאה לצינור טחינה ללא נוקלאז בנפח 2.0 מ"ל (מומלץ HT-200-M) המכילה חרוזי זירקוניה בגודל 3~4 3 מ"מ (מומלץ G{{6} }ז) ומקורר מראש בחנקן נוזלי. מניחים את צינור הטחינה על המטחנה (מומלץ KZ-5F-3D) (מקררים את המתאם במהירות בחנקן נוזלי לפני הנחת צינור הטחינה) וטוחנים עד שהוא אבקה לחלוטין (אם הרקמה אינה טחון לחלוטין לאבקה, זה ישפיע על התפוקה והאיכות של ה-DNA). לאחר מכן הוסף כמות מתאימה של Buffer PGLA (השימוש המומלץ בטבלה 1) והנח אותו שוב על המטחנה למשך דקה אחת. לאחר השלמת הטחינה, הוסף 10 μL RNase A לצינור הטחינה, ערבב את התוכן הפוך ודגירה ב-65 מעלות למשך 15 דקות, תוך ערבוב הפוך כל 5 דקות.

2. הוסף כמות מתאימה של Buffer PGLB (השימוש המומלץ בטבלה 1) לצינור הצנטריפוגה, הפוך במהירות וערבב היטב, והנח על קרח למשך 5 דקות.

3. צנטריפוגה ב-12,000 סל"ד למשך 5 דקות ב-4 מעלות, העבירו את הסופרנטנט לשפופרת צנטריפוגה חדשה של 1.5 מ"ל (אם עדיין יש חומר צף בסופרנטנט המתקבל, יש צורך לבצע צנטריפוגה ב-12,{ {8}} סל"ד למשך 2 דקות ב-4 מעלות שוב והעבירו את הסופרנטנט לצנטריפוגה חדשה אחרת של 1.5 מ"ל צינור).

4. הוסף Buffer GB באותו נפח כמו הסופרנטנט לצינור הצנטריפוגה וערבב אותו הפוך.

5. מניחים את עמודת ה-DNA Spin על צינור האיסוף, ומעבירים את התערובת ל-DNA Spin Column. כל תוספת אינה עולה על 600 μL, אם היא עולה, ניתן להוסיף אותה בקבוצות.

6. צנטריפוגה ב-12,000 סל"ד למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר, והשליך את התסנין. החזירו את עמודת ה-DNA Spin לצינור האיסוף.

7. הוסף 500 μL Buffer GD ל-DNA Spin Column, וצנטריפוגה ב-12,000 סל"ד למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר, ואז השלך את התסנין.

8. הוסף 600 μL Buffer PW ל-DNA Spin Column (אנא הוסף Buffer PW לאורך דופן הצינור כדי לעזור לשטוף את שאריות המלח על דופן הצינור), וצנטריפוגה ב-12,000 סל"ד למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר, ואז להשליך את התסנין.

9. חזור על שלב 8.

10. הכנס את עמודת ה-DNA Spin לצינור האיסוף, צנטריפוגה ב-12,000 סל"ד למשך 2 דקות בטמפרטורת החדר כדי להסיר את שאריות הנוזל.

11. העבירו את עמודת ספין לצינור צנטריפוגה חדש ללא Nuclease של 1.5 מ"ל, עמדו בטמפרטורת החדר למשך 3 ~ 5 דקות, כך שניתן יהיה להתאדות לחלוטין את שארית האתנול של עמודת ספין.

12. הוסף 50~100 μL Buffer TE או Nuclease-free Water לצינור הצנטריפוגלי, עמוד בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות (חימום Buffer TE או Nuclease-free Water ל-65 מעלות מועיל לשיפור יעילות הפליטה).

13. צנטריפוגה ב-12,000 סל"ד למשך 2 דקות בטמפרטורת החדר כדי לאסוף DNA. כדי לקבל ריכוז גבוה יותר של DNA, אתה יכול גם להוסיף את הפורמט הראשון בחזרה ל-DNA Spin Column, ולאחר מכן לעמוד בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות ולצנטריפוגה במשך 2 דקות בטמפרטורת החדר כדי לאסוף שוב DNA.

 

 

1. נסו להשתמש ברקמות צמחיות טריות כדי להבטיח את התשואה והשלמות של ה-DNA הגנומי.

2. לשימור לטווח ארוך, יש לחלץ את ה-DNA המופק עם Buffer TE ולאחסן אותו ב--80 מעלות.

3. ה-DNA הגנומי המתקבל צריך להימנע מהקפאה והפשרה חוזרות ונשנות.

4. אם מאגר התמוגה צמיג מאוד, מומלץ להקטין את גודל המדגם הראשוני או להגדיל את כמות חיץ התמוגה.

5. עבור הדגימות עם יותר תכולת מים, ניתן להגדיל את גודל הדגימה הראשונית בהתאם.

לוּחַ זְמַנִים

תפוקת ה-DNA הגנומית המופקת ממגוון דגימות צמחים ופטריות על ידי ערכה זו מוצגת בטבלה שלהלן. תפוקת DNA גנומי קשורה למיני צמחים, איברים ומצב צמיחה. המינון המומלץ של הדגימות מוצג בטבלה שלהלן.

 

לִטעוֹם	מִנוּן	תפוקת DNA
עלה של גינקו בילובה	100 מ"ג	5~10 אג'
עלה של Gossypium hirsutum	50 מ"ג	5~10 אג'
עלה Arachis hypogaea	50 מ"ג	5~10 אג'
עלה Solanum lycopersicum	70 מ"ג	5~10 אג'
זרע Gossypium hirsutum	100 מ"ג	10~30 ug
זרע ארכיס היפוגאאה	100 מ"ג	3~5 אג'
פקעת Solanum tuberosum	100 מ"ג	0.3~3 ug
זרע Triticum aestivum	100 מ"ג	10~30 ug
זרע Carthamus tinctorius	100 מ"ג	5~10 אג'
Philodendron bipinnatifidum עלה שוט	100 מ"ג	5~10 אג'
עלה פינוס	100 מ"ג	10~15 ug
עלה קופרסוס פונבריס	100 מ"ג	15~30 אג'
עלה של Bryophyllum pinnatum	100 מ"ג	0.5~2 ug
Pleurotus ostreatus	100 מ"ג	0.5~1.5 ug
עלה אלוורה	200 מ"ג	0.5~2 ug
פרי Solanum lycopersicum	300 מ"ג	0.5~1.5 ug

 

לשימוש מחקר בלבד!

 

 

תגיות פופולריות: ערכת דנ"א גנומית צמחית עבור פוליסכרידים ופוליפנולים, סין ערכת DNA גנומית צמחית עבור פוליסכרידים ופוליפנולים יצרנים, ספקים, מפעלים