מידע על המוצר

שם המוצר	חָתוּל. לֹא.	מפרט
Mito Tracker Red CMXRos	G1723-50UG	50 אג'

תיאור המוצר/מבוא

MitoTracker Red CMXRos (Mitochondrial Red Fluorescent Probe) היא נגזרת X-rosamine עם משקל מולקולרי של 531.52, אורך גל עירור של 578 ± 3 ננומטר ואורך גל פליטה של 599 ± 4 ננומטר. הצבע יכול להיכנס ישירות לתאים חיים ולהתמקם על המיטוכונדריה ומסוגל להיקשר קוולנטית למיטוכונדריה. העיקרון של תיוג ספציפי של המיטוכונדריה הוא ששלד הבדיקה בעל המטען החיובי יכול להיות ממוקם על המיטוכונדריה הטעונות שלילי, וקבוצת הכלורומתיל על הבדיקה יכולה להיקשר קוולנטית לקבוצת הסולפהדריל החופשית במיטוכונדריה, הממלאת את התפקיד של תיוג פלואורסצנטי. ; ניתן לסמן את המיטוכונדריה בתא פשוט על ידי דגירה שלהם עם תאים חיים למשך פרק זמן מסוים, ולאחר סימון המיטוכונדריה, ניתן לעבד את המיטוכונדריה עוד יותר באמצעות הקיבוע והניקוב, אשר ניתן להשתמש בהם עבור הניסויים הרב-תיוגים הבאים. .

תנאי אחסון ומשלוח

ספינה עם קרח רטוב; אחסן ב--20 מעלות הרחק מאור, תקף ל-12 חודשים.

תוכן המוצר

רְכִיב	G1723-50UG
Mito Tracker Red CMXRos	50 אג'
יָדָנִי	1 מחשב

פרוטוקול בדיקה / נהלים

1. הכנת תמיסת עבודה בוחנת:

1.1. מוצר זה הוא בצורת אבקה יבשה, אשר יש לצנטריפוגה קצרות במהירות גבוהה לפני השימוש כדי להבטיח שהיא שוקעת בתחתית הצינור. ספק DMSO בדרגת תא משלך.

1.2. הכנת תמיסת אחסון: הוסף 94 μL DMSO (רמת התא) לתוך הצינור, נשוף וערבב היטב להמסה מלאה של הצבע, כלומר תמיסת האחסון של צבע ניאון מיטוכונדריאלי בריכוז של 1 מ"מ (מידע על משקל מולקולרי על תווית המוצר) מתקבלת, ולאחר מכן צנטריפוגה קצרות במהירות גבוהה כדי למנוע אובדן של ריאגנטים התלויים על הקיר. אחסן את פתרון האחסון ב--20 מעלות. מומלץ לאחסן אותו בגדלים קטנים יותר ולהימנע מהקפאה והפשרה חוזרת.

1.3. הכנת תמיסת עבודה של בדיקה: אם הבדיקה מבוצעת ישירות לאחר צביעה, יש לדלל את תמיסת האחסון לתמיסת עבודה של ניסוי מיטוכונדריאלי בריכוז סופי של 0.1-0.25 מיקרומטר עם חיץ ביולוגי (Hanks, PBS ) או מדיום בזאלי נטול סרום; אם נדרשות פעולות עוקבות כגון קיבוע וניקוב לאחר צביעה, יש לדלל את תמיסת האחסון לתמיסת עבודה של ניסוי מיטוכונדריאלי בריכוז סופי של 0.4-0.6 מיקרומטר עם חיץ ביולוגי (Hanks, PBS) או מדיום בזאלי נטול סרום;

2. צביעת תאים (הפרוטוקול הבא מיועד לתאים נצמדים; נדרשת צנטריפוגה להחלפת תאי ההשעיה)

2.1. התאים נטועים על צלחות תרבית תאים או צלחות מטפסות לתאים עד שהם מתכנסים במידה מסוימת;

2.2. מדיום תרבית התא מוסר ונשטף 1-2 פעמים עם חיץ מחומם מראש למשך 3-5 דקות בכל פעם;

2.3. הוסף את תמיסת העבודה המחוממת מראש לזיהוי מיטוכונדריה ודגירה ב-37 מעלות למשך 30 דקות בחממה של תרבית תאים (בשל סוגי תאים ומצבים שונים, ניתן להתאים את זמן הדגירה במידה מסוימת);

2.4. הסר את תמיסת הדגירה ושטוף בתמיסת חיץ 2-3 פעמים במשך 3-5 דקות בכל פעם;

2.5. ישירות או עם מדיום הרכבה נגד דהייה (מומלץ G1401) הסרטים אטומים ונצפו במיקרוסקופ פלואורסצנטי (Ex=579 ננומטר, Em=599 ננומטר);

3. קיבוע וניקוב של תאים ומניפולציות אחרות (אופציונלי):

הערה: לאחר צביעה, ניתן לתקן ולחורר את המוצר הזה, אך אות הפלורסנט יוחלש לאחר הקיבוע.

3.1. קיבוע תאים

3.1.1. תאים שטופלו בצביעה ושטיפה של צבע ניאון מיטוכונדריאלי מתווספים למקבע (מומלץ G1101) ומקובעים למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר;

3.1.2. הסר את המקבע ושטוף עם חיץ 2-3 פעמים במשך 3-5 דקות בכל פעם;

3.2. ניקוב תאים

3.2.1. לתאים המקובעים והשטופים מוסיפים 0.2-0.5% Triton X-100 ומחוררים במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר;

3.2.2. נוזל המחורר מוסר ונשטף בתמיסת חיץ 2-3 פעמים במשך 3-5 דקות בכל פעם;

3.3. התאים נצבעים ולאחר מכן קבועים ומחוררים לעיבוד, וניתן להשתמש בהם לניסויים הבאים כגון ריבוי תיוג.

פֶּתֶק

1. בשל הסוגים והמצבים השונים של התאים, ניתן להתאים את ריכוז העבודה של הצבע ואת זמן הדגירה.

2. יש להשתמש בצבע עבור לוקליזציה מיטוכונדריאלית במצב של תאים חיים, ולא ניתן לתקן את התאים תחילה, אחרת זה יוביל לתוצאות חיוביות שגויות של לוקליזציה לא מדויקת. ניתן לבצע קיבוע ופעולות הבאות לאחר צביעה של תאים חיים.

3. כאשר צובעים ושוטפים תאים חיים, יש לחמם מראש את תמיסת העבודה של הבדיקה ומאגר הכביסה ב-37 מעלות. צביעה ושטיפה מבוצעים על ידי דגירה באינקובטור כדי לא להשפיע על המורפולוגיה של התאים על ידי גירוי הבדלי טמפרטורה.

4. על מנת למנוע כיבוי הקרינה, יש להפעיל את כל תהליך הצביעה הרחק מאור.

5. יש לאחסן תערובות מאסטר בדיקה במיכלים נפרדים כדי למנוע הקפאה והפשרה חוזרות ונשנות. כדי למנוע בזבוז, תמיסת הצביעה מוכנה לפי הצורך, מוכנה לשימוש.

6. למען בריאותך ובטיחותך, נא ללבוש מעיל מעבדה וכפפות במהלך הפעולה.

לשימוש מחקר בלבד!

תגיות פופולריות: mitotracker red cmxros, סין mitotracker red cmxros יצרנים, ספקים, מפעל