פתרון ריכוז אקסוזום

אקסוזומים הם שלפוחיות קרומיות בקנה מידה ננומטרי בגודל אחיד, עם גודל חלקיקים שנע בין 30 ל-150 ננומטר, המופרשות באופן פעיל על ידי תאים לחלל החוץ תאי. לשלפוחית ​​זו יש סמן ביולוגי ספציפי משלה, והיא מכילה חלבונים, mRNA, miRNA, שומנים וחומרים אחרים, שיכולים להשתתף בתהליך של צמיחת תאים, התפשטות, התמיינות, הגירה, אנגיוגנזה וצמיחת גידול באמצעות חומר בין תאים ותקשורת אותות.

מוצר זה הוא תמיסה מרוכזת נפוצה של Exosomes, שיכולה להשיג במהירות מספר רב של חלקיקי Exosomes שלמים מדגימות ביולוגיות נוזליות כגון סופרנטנט תאים וסרום בעלי חיים.

הובלה בטמפרטורת החדר; אחסן בטמפרטורת החדר עם תקופת תוקף של 12 חודשים.

1. טיפול מקדים לדוגמא:

א) דגימות ביולוגיות של אקסוזום בעל תוכן נמוך (באמצעות "Cell Supernatant" כדוגמה): קח את הסופרנטנט של התא, צנטריפוגה ב-4 מעלות, 3000×g למשך 10 דקות כדי להסיר פסולת התא; צנטריפו את הסופרנטנט שוב ​​ב-4 מעלות ו-10000×g למשך 20 דקות. לאחר מכן מסננים את הסופרנטנט באמצעות קרום מסנן של 0.22 מיקרומטר וטהר אותו לשימוש מאוחר יותר.

ב) דגימות ביולוגיות אקסוזומיות גבוהות (באמצעות "סרום בעלי חיים" כדוגמה): קח סרום של בעלי חיים, צנטריפוגה ב-4 מעלות, 3000×g למשך 10 דקות באגרוף; לאחר מכן צנטריפו את הסופרנטנט ב-4 מעלות ו-10000×g למשך 20 דקות. לסנן אחרון את הסופרנטנט באמצעות קרום מסנן 0.22 מיקרומטר. לאחר טיהור ראשוני, יש לדלל את סרום החיות ביחס של 1:9 לנפח 1×PBS לשימוש מאוחר יותר.

2. ריכוז אקסוזום:

א) קח את הדגימה הביולוגית המעובדת וערבב אותה עם נפח שווה של תרכיז אקסוזום. לאחר תנודת מערבולת אינטנסיבית במשך 15 שניות -60 שניות, הניחו לו לעמוד שעתיים ב-4 מעלות במקרר (אופציונלי: תנודת מערבולת כל 30 דקות במהלך התקופה הנייח).

ב) מניחים את התמיסה המעורבת בצנטריפוגה, צנטריפוגה ב-4 מעלות וב-10000×g למשך 60 דקות; השליכו את הסופרנטנט.

ג) הוסף חיץ PBS מקורר מראש ביחס של 1 x נפח PBS=100:1 בהתאם לנפח תרכיז האקסוזום, והשהה מחדש וצנטריפוגה לצורך משקעים (הערה: זה שווה ערך לריכוז של 100×, ושונה ניתן להוסיף נפחים של PBS לפי הצורך להשעיה מחדש).

ד) העבירו את ההשעיה הכבדה לשפופרת צנטריפוגה של 1.5 מ"ל והניחו אותה בצנטריפוגה. צנטריפוגה ב-4 מעלות ו-12000 סל"ד למשך 5 דקות; אסוף סופרנטנט.

ה) הסופרנטנט עשיר באקסוזומים וניתן להשתמש בו לניסויים הבאים. ניתן גם לארוז ולאחסן אותו ב--80 מעלות לשימוש עתידי.

1. ניתן לאחסן מוצר זה ביציבות בטמפרטורת החדר למשך זמן רב. נא לנער ולערבב היטב לפני השימוש.

2. ניתן להשתמש במוצר זה כתוספת לריכוז הסופרנטנט בתא בעמודת הכרומטוגרפיה של הפרדת אקסוזום G4113 (סופרנטנט תאים).

3. במהלך הניסוי, נא ללבוש בגדי מעבדה וכפפות חד פעמיות כדי למנוע זיהום ולהבטיח בטיחות.

לשימוש מחקר בלבד!

תגיות פופולריות: תמיסת ריכוז אקסוזום, יצרנים, ספקים, מפעלים של פתרונות ריכוז אקסוזום