מדיום להפרדת לימפוציטים (ארנב)

מוצר זה הוא תמיסת הפרדת צפיפות שיפוע המתאימה להפרדה של לימפוציטים בדם היקפיים של ארנב. העיקרון שלו מבוסס בעיקר על הפרש הצפיפות בין תאי דם היקפיים שונים (הצפיפות של תאי דם אדומים וגרנולוציטים היא בערך 1.090 גרם/מ"ל; טסיות דם היא 1.030-1.035 גרם/ מ"ל; לימפוציטים ומונוציטים הם 1.075-1.090 גרם/מ"ל) ומופרדים מדם היקפי על ידי צפיפות שיפוע צנטריפוגה. מוצר זה הוא תמיסת הפרדה מוכנה לשימוש סטרילית ורמת אנדוטוקסין נמוכה בצפיפות של 1.083 ± 0.001 גרם/מ"ל (20 מעלות). המוצר מותאם על בסיס Ficoll-meglumine המסורתי לשמירה על יציבות תמיסת ההפרדה למשך זמן רב יותר לאחר הוספת הדם, הפעולה פשוטה והלימפוציטים המבודדים הינם בטוהר גבוה ובמצב טוב.

משלוח עם קרח רטוב; אחסן 2-8 מעלות הרחק מאור, תקף ל-12 חודשים.

להפרדה של 1 מ"ל של לימפוציטים מדם היקפי של ארנב, יחס הנפח של דם למדיום הפרדת לימפוציטים הוא 1:1-1:2, עם התאמות מתאימות בטווח זה; יש להקפיד בבחירת צינור הצנטריפוגה שהנפח הכולל של המדיום להפרדת דם ולימפוציטים לא יעלה על שני שליש מנפח הצינור.

1. קח 1 מ"ל של דם מלא נוגד קרישה טרי (ניתן להשתמש בהפרין, EDTA, נתרן ציטראט ונוגדי קרישה אחרים), מדולל בנפח שווה של PBS (מומלץ G4202) או חוצץ Hanks (מומלץ g4203) אינו מכיל סידן ומגנזיום להשגת 2 מ"ל של דם מלא מדולל.

2. הפיפטה 3 מ"ל של תמיסת בידוד לימפוציטים בדם היקפי מחולדות ועכברים לתוך שפופרת צנטריפוגה סטרילית של 15 מ"ל (מומלץ EP-1500-J).

3. הטה את צינור הצנטריפוגה ב-45 מעלות והוסף באיטיות 2 מ"ל של דם מדולל לאורך דופן הצינור לתוך צינור הצנטריפוגה, כך שהדם מונח שטוח על השכבה העליונה של מדיום הפרדת לימפוציטים בדם היקפי של ארנבת.

4. מומלץ להשתמש בצנטריפוגה עם ראש אופקי, למקם את הצינור במתאם הראש האופקי, להפחית את מהירות הצנטריפוגה (מתאימות במהירויות 3-5) ולצנטריפוגה ב-800 xg למשך 25 דקות בטמפרטורת החדר.

5. לאחר הצנטריפוגה, הצינור מוחזק בעדינות על מתלה צינור ונצפה ריבוד ברור: השכבה העליונה ביותר היא שכבת הפלזמה; השכבה האמצעית העליונה היא שכבת הלימפוציטים; השכבה האמצעית התחתונה היא שכבת הפרדת לימפוציטים בינונית; והשכבה התחתונה ביותר היא שכבת האריתרוציטים והגרנולוציטים (עיין באיור המצורף).

6. הסר את שכבת הפלזמה העליונה ביותר ושאוב בזהירות את שכבת tunica albuginea (שכבת לימפוציטים) לתוך שפופרת צנטריפוגה סטרילית חדשה.

7. שטפו עם 8 מ"ל של PBS (מומלץ G4202) או חיץ אחר, צנטריפוגה ב-100 xg למשך 10 דקות, ואז השליכו את הסופרנטנט.

8. חזור על שלב 7 (אופציונלי);

9. השעיה מחודשת של לימפוציטים במדיום או במאגר הנדרש בהתאם למטרת הניסוי.

10. ניתן לשפר עוד יותר את הטוהר של הלימפוציטים על ידי שתילת הלימפוציטים המחודשים לתוך צלחת תרבית או בקבוק, דגירה באינקובטור למשך 1-2 שעות, ולאחר מכן העברת התאים הנספגים לצלחת תרבית או בקבוק חדש (אופציונלי). ).

1. יש לאזן את המוצר במלואו ולערבב הפוך בטמפרטורת החדר לפני השימוש. הטמפרטורה המתאימה להפרדה היא 18-25 מעלות.

2. כדי לשמור על פעילות הלימפוציטים, עדיף לבחור דם נוגד קרישה טרי תוך 2 שעות מאיסוף הדם; אם נדרשת תרבית ובדיקה נוספת של הלימפוציטים המבודדים, אנא שימו לב לפעולה האספטית במהלך איסוף הדם וההפרדה.

3. דילול או שטיפת המאגר, אין להשתמש במאגר המכיל יוני סידן ומגנזיום כדי למנוע הצטברות תאי דם

4. ספיגה מוגזמת של רכיבים מחוץ לשכבת הלימפוציטים tunica albuginea תגרום לערבב חלק מהגרנולוציטים או טסיות הדם בצומת.

5. להבדלים בין דגימות דם עשויה להיות השפעה על תוצאות ההפרדה. הכוח והזמן הצנטריפוגלי ניתנים להתאמה בהתאם למצב בפועל. הכוח הצנטריפוגלי הייחוס וטווח הזמן הם 500-1000 g ו-20-30 דקות.

6. זה נורמלי שכדוריות דם אדומות ישקעו לאחר ערבוב של דם ומדיום הפרדת לימפוציטים למשך זמן מסוים.

7. למען בטיחותך ובריאותך, נא ללבוש משקפי בטיחות, כפפות או ביגוד מגן.

מצורף: תרשים סכמטי של כל שכבה לפני ואחרי הפרדה

מוצר זה מיועד רק למטרות מחקר מדעי, לא לאבחון קליני!

תגיות פופולריות: מדיום הפרדת לימפוציטים (ארנב), יצרנים, ספקים, מפעלים של מדיום לימפוציטים (ארנב)